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电穿孔仪的操作方式有哪些?
时间:2025-05-08 11:02:54 点击次数:86

电穿孔仪是一种通过高压电脉冲在细胞膜上形成临时孔隙的仪器,广泛应用于基因转染、药物递送等领域。以下是其核心操作方式:

1. 实验前的准备工作

在启动电穿孔仪前,需完成以下关键步骤:

  • 细胞悬液制备:将细胞从培养瓶中取出,使用细胞计数器调整浓度至 1-2×10⁶ cells/mL,并转移至电穿孔杯中(每杯约500μL)。

  • 参数设置:根据细胞类型选择电压(100-1000mV)、脉冲宽度(1-10ms)及脉冲间隔(10-100ms)。例如,基因转染实验常用参数为250mV、5ms、30ms。

  • 仪器校准:检查电极接触面是否清洁,电源线是否完好,确保设备处于稳定工作状态。

2. 电穿孔操作执行

操作过程中需严格遵循以下步骤以保证实验成功率:

  1. 样品加载:将细胞悬液小心倒入电击杯,避免产生气泡。

  2. 电极接触:将电击杯放入仪器电极槽,确保电极与样品充分接触。

  3. 启动脉冲:按下“Pulse”键,仪器根据预设参数施加电场。操作时需观察显示屏数据,如电压表、电流表读数。

  4. 终止反应:电穿孔完成后,立即加入培养基终止反应,并转移至培养箱。


电穿孔仪

电穿孔仪的安全操作规范

为保障实验安全和仪器性能,需注意以下要点:

1. 安全防护措施

电穿孔仪涉及高压电和生物样本,操作时必须佩戴绝缘手套、护目镜等防护装备。实验室需配备急救箱和灭火器,并确保所有人员接受过专业培训。

2. 清洁与维护

实验结束后需及时清洁电极和电击杯,步骤如下:

  • 用去离子水冲洗电极表面,去除残留细胞碎片。

  • 用无水乙醇或丙酮擦拭电极,消除油脂污染。

  • 定期检查电极导电性,必要时用细砂纸打磨氧化区域。

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