紫外交联仪是一种利用紫外线使生物大分子发生交联反应的仪器,常用于核酸、蛋白质等生物样品的研究。不同类型的紫外交联仪对样品的需求可能略有不同,但一般有以下常见要求:
样品形态
核酸样品:可以是溶液状态的 DNA 或 RNA,如质粒 DNA、PCR 产物、RNA 转录本等;也可以是固定在膜上的核酸,如尼龙膜或硝酸纤维素膜上的 DNA 或 RNA 印迹。
蛋白质样品:通常为溶液中的蛋白质,如纯化的蛋白、蛋白提取物等;也可以是聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)分离后的蛋白质,经转膜后固定在膜上进行交联。
样品纯度
无论是核酸还是蛋白质样品,都要求具有一定的纯度。杂质可能会干扰交联反应,或在后续分析中产生非特异性信号。例如,核酸样品中不应含有过多的盐离子、有机溶剂或其他杂质,蛋白质样品应尽量去除非目的蛋白及其他污染物。
样品浓度
样品需要有合适的浓度范围。对于核酸样品,一般浓度在微克 / 微升级别较为合适。如果浓度过低,可能导致交联效率低下,难以获得足够的交联产物用于检测和分析;浓度过高则可能使样品过于黏稠,影响紫外线的穿透和均匀照射,也可能导致交联过度,影响后续实验结果。蛋白质样品的浓度通常也需要根据具体实验要求进行调整,一般在毫克 / 毫升级别。
样品量
紫外交联仪有不同的规格和型号,其样品处理量也有所不同。常见的小型紫外交联仪可处理几微升至上百微升的样品,而大型仪器则可处理毫升级甚至更大体积的样品。在选择紫外交联仪时,需要根据实验所需处理的样品量来选择合适的仪器。同时,要确保样品量能够均匀覆盖在照射区域内,以保证紫外线照射的均匀性。
其他要求
避光保存:在交联反应前,样品应尽量避光保存,以防止核酸或蛋白质在光照条件下发生不必要的光化学反应,影响交联效果。
合适的缓冲液:样品所处的缓冲液体系也会对交联反应产生影响。例如,缓冲液的 pH 值、离子强度等需要根据样品的性质和实验要求进行优化。一些缓冲液成分可能会吸收紫外线,从而影响交联效率,此时需要选择合适的缓冲液或进行适当的稀释。
